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凝膠過濾填料的特點和選用要點來看看

發布時間:2021-01-21瀏覽:760次

  凝膠過濾或尺寸排阻是一種簡單、的層析方法,用于蛋白或生物大分子的純化。
  凝膠過濾填料是由葡聚糖苷和3-氯-1,2環氧丙烷以醚鍵相互鉸鏈而成,不同型號的葡聚糖凝膠用英文字母G表示,如G-25,G-75等,G后面的數字為凝膠吸水量再乘以10。sephacryl:為葡聚糖偶聯丙烯基,再和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的介質。它有較高的硬度,能承受比普通凝膠更大的靜水壓力,由于屬于部分大網孔型凝膠,可用于分離蛋白質、核酸、多糖和蛋白聚糖甚是病毒顆粒。
  凝膠過濾填料特點:
  1、適合用有機溶劑分離嗜脂性分子,可以非常經濟地大規模制備各種天然產物
  2、結合凝膠過濾、分配色譜及吸附性層析于一身,分離結構非常相近的分子
  3、載量可高達300mg樣品/ml凝膠,極少需要再生,分離效果可保持十幾年不變。
  作為凝膠柱層析中的關鍵一環,選擇合適的填料是關重要的,下面我們來了解下。
  1.當目標蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚時,可用PAGE電泳方法或層析方法加以測定。分離范圍廣闊的Superose HR預裝柱很適合測定未知蛋白的分子量。用少量離子交換介質在多個含不同PH緩沖液的試管中,可簡易地測出PI,并選擇純化用緩沖液的佳PH。
  2.若對目標蛋白的特性或樣品成分不太了解,可嘗試幾種不同的純化方法:
  (1)使用通用的凝膠過濾方法,選擇分離范圍廣闊的介質如Superose、Sephacryl HR依據分子量將 樣品分成不同組份。
  (2)用含專一配體或抗體的親和層析介質結合目標蛋白。亦可用各種活化偶聯介質偶聯目標蛋白的底物、受體等自制親和介質,再用以結合目標蛋白。一步即可得到高純度樣品。
  (3)體積大的樣品,往往使用離子交換層析加以濃縮及粗純化。高鹽洗脫的樣品,可再用疏水層析純化。疏水層析利用高鹽吸附、低鹽洗脫的原理,洗脫樣品又可直接上離子交換等吸附性層析。兩種方法常被交替使用于純化流程中。

 

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